Title (eng)
Characterization of antibodies recognizing the alpha 5 subunit of nicotinic acetylcholine receptors
Parallel title (deu)
Charakterisierung von spezifischen Antikörpern, welche gegen die Alpha-5-Untereinheit des nikotinischen Acetylcholinrezeptors gerichtet sind.
Author
Christoph Zlabinger
Advisor
Petra Scholze
Assessor
Petra Scholze
Abstract (deu)
Unser Ziel war es, spezifische Antikörper gegen die alpha-5-Untereinheit des nikotinischen Acetylcholinrezeptors (nAChR) herzustellen, die in Immunopräzipitation und Immunzytologischen Methoden anwendbar sind. Zusätzlich wurde mit spezifischen Antikörpern gegen Alpha2, Alpha3, Alpha4, Alpha5, Alpha6, Beta2 und Beta4 die Untereinheit-Zusammensetzung von nAChRs im Interpeduncular nucleus (IPN) von wild-typ, Beta2-knockout and Beta4-knockout Mäusen bestimmt.
In heterologem Gewebe ergaben sowohl Immunopräzipitationen als auch die Färbungen spezifische und quantitativ korrekte Ergebnisse. In nativem Gewebe hingegen ergaben die Immunopräzipitationen, obwohl sie spezifisch waren, nur 30-50% der Referenzwerte. Die Immunozytochemischen und Immunohistochemischen Färbungen zeigten im heterologen Gewebe spezifisches Signal; im nativen Gewebe allerdings war keine spezifische Färbung möglich.
Die Rezeptorzusammensetzung des IPNs in der Maus wurde mithilfe des gut charakterisierten Alpha5S23 Antikörpers untersucht: Alpha2 39.15 ± 3.18 fmol/mg Proteinlysat; Alpha3 174.16 ± 17.35 fmol/mg Proteinlysat; Alpha4 139.40 ± 8.40 fmol/mg Proteinlysat; Alpha5 30.57 ± 1.32 fmol/mg Proteinlysat; Alpha6 9.84 ± 0.58 fmol/mg Proteinlysat; Beta2 183.87 ± 13.20 fmol/mg Proteinlysat; Beta4 161.37 ± 21.77 fmol/mg Proteinlysat.
Mithilfe der Alpha5, Beta2 und Beta4-Knockout Geweben konnten wir Rückschlüsse auf die Koassemblierung der Rezeptoren ziehen, unter der Annahme , dass keine Kompensationsmechanismen für Knockout Untereinheiten stattfinden. Unter diesen Vorraussetzungen sahen wir, dass Alpha2, Alpha4, Alpha5 und Alpha6 mit Beta2, und Alpha3 mit Beta4 koassemblieren wenn sie einen Rezeptor bilden.
Abstract (eng)
Our aim was to generate subunit specific antibodies against the alpha5 nAChR subunit, capable of performing in Immunoprecipitation, Immunohistochemical and Immunocytochemical staining methods. Additionally with specific antibodies against alpha2, alpha3, alpha4, alpha5, alpha6, beta2 and beta4 subunits, the nAChR subunit composition of wild-type, alpha5-knockout, beta2-knockout and beta4-knockout mouse interpeduncular nucleus (IPN) should be revealed.
In heterologous tissue both techniques Immunoprecipitation and Immunocytochemistry yield specific and quantitatively correct results. However in native tissue Immunoprecipitation proved high specificity of the antibodies but the precipitated receptor amount was only 30-50% of the reference antibody. In Immunocytochemical and Immunocytochemical studies only heterologous tissue could be stained specifically.
Additionally using the previously generated and excellently working antibody alpha5S23 the wild-type mouse IPN nAChR-subunit composition with focus on alpha5 containing receptors was successfully identified: alpha2 39.15 ± 3.18 fmol/mg lysate protein; alpha3 174.16 ± 17.35 fmol/mg lysate protein; alpha4 139.40 ± 8.40 fmol/mg lysate protein; alpha5 30.57 ± 1.32 fmol/mg lysate protein; alpha6 9.84 ± 0.58 fmol/mg lysate protein; beta2 183.87 ± 13.20 fmol/mg lysate protein; beta4 161.37 ± 21.77 fmol/mg lysate protein.
With the investigation of subunit changes in alpha5, beta2 and beta4-knockout tissue we could conclude with the presumption of no compensation mechanisms, that alpha2, alpha4, alpha5 and alpha6 co-assemble with beta2 and alpha3 co-assembles with beta4.
Keywords (eng)
nAChRAlpha 5antibodyIPNSCGsubunit composition
Keywords (deu)
naChRAlpha 5AntikoerperIPNSCGZusammensetzung
Subject (deu)
Type (deu)
Persistent identifier
Extent (deu)
72 S.
Number of pages
72
Study plan
Masterstudium Molekulare Biologie
[UA]
[066]
[834]
Association (deu)
Title (eng)
Characterization of antibodies recognizing the alpha 5 subunit of nicotinic acetylcholine receptors
Parallel title (deu)
Charakterisierung von spezifischen Antikörpern, welche gegen die Alpha-5-Untereinheit des nikotinischen Acetylcholinrezeptors gerichtet sind.
Author
Christoph Zlabinger
Abstract (deu)
Unser Ziel war es, spezifische Antikörper gegen die alpha-5-Untereinheit des nikotinischen Acetylcholinrezeptors (nAChR) herzustellen, die in Immunopräzipitation und Immunzytologischen Methoden anwendbar sind. Zusätzlich wurde mit spezifischen Antikörpern gegen Alpha2, Alpha3, Alpha4, Alpha5, Alpha6, Beta2 und Beta4 die Untereinheit-Zusammensetzung von nAChRs im Interpeduncular nucleus (IPN) von wild-typ, Beta2-knockout and Beta4-knockout Mäusen bestimmt.
In heterologem Gewebe ergaben sowohl Immunopräzipitationen als auch die Färbungen spezifische und quantitativ korrekte Ergebnisse. In nativem Gewebe hingegen ergaben die Immunopräzipitationen, obwohl sie spezifisch waren, nur 30-50% der Referenzwerte. Die Immunozytochemischen und Immunohistochemischen Färbungen zeigten im heterologen Gewebe spezifisches Signal; im nativen Gewebe allerdings war keine spezifische Färbung möglich.
Die Rezeptorzusammensetzung des IPNs in der Maus wurde mithilfe des gut charakterisierten Alpha5S23 Antikörpers untersucht: Alpha2 39.15 ± 3.18 fmol/mg Proteinlysat; Alpha3 174.16 ± 17.35 fmol/mg Proteinlysat; Alpha4 139.40 ± 8.40 fmol/mg Proteinlysat; Alpha5 30.57 ± 1.32 fmol/mg Proteinlysat; Alpha6 9.84 ± 0.58 fmol/mg Proteinlysat; Beta2 183.87 ± 13.20 fmol/mg Proteinlysat; Beta4 161.37 ± 21.77 fmol/mg Proteinlysat.
Mithilfe der Alpha5, Beta2 und Beta4-Knockout Geweben konnten wir Rückschlüsse auf die Koassemblierung der Rezeptoren ziehen, unter der Annahme , dass keine Kompensationsmechanismen für Knockout Untereinheiten stattfinden. Unter diesen Vorraussetzungen sahen wir, dass Alpha2, Alpha4, Alpha5 und Alpha6 mit Beta2, und Alpha3 mit Beta4 koassemblieren wenn sie einen Rezeptor bilden.
Abstract (eng)
Our aim was to generate subunit specific antibodies against the alpha5 nAChR subunit, capable of performing in Immunoprecipitation, Immunohistochemical and Immunocytochemical staining methods. Additionally with specific antibodies against alpha2, alpha3, alpha4, alpha5, alpha6, beta2 and beta4 subunits, the nAChR subunit composition of wild-type, alpha5-knockout, beta2-knockout and beta4-knockout mouse interpeduncular nucleus (IPN) should be revealed.
In heterologous tissue both techniques Immunoprecipitation and Immunocytochemistry yield specific and quantitatively correct results. However in native tissue Immunoprecipitation proved high specificity of the antibodies but the precipitated receptor amount was only 30-50% of the reference antibody. In Immunocytochemical and Immunocytochemical studies only heterologous tissue could be stained specifically.
Additionally using the previously generated and excellently working antibody alpha5S23 the wild-type mouse IPN nAChR-subunit composition with focus on alpha5 containing receptors was successfully identified: alpha2 39.15 ± 3.18 fmol/mg lysate protein; alpha3 174.16 ± 17.35 fmol/mg lysate protein; alpha4 139.40 ± 8.40 fmol/mg lysate protein; alpha5 30.57 ± 1.32 fmol/mg lysate protein; alpha6 9.84 ± 0.58 fmol/mg lysate protein; beta2 183.87 ± 13.20 fmol/mg lysate protein; beta4 161.37 ± 21.77 fmol/mg lysate protein.
With the investigation of subunit changes in alpha5, beta2 and beta4-knockout tissue we could conclude with the presumption of no compensation mechanisms, that alpha2, alpha4, alpha5 and alpha6 co-assemble with beta2 and alpha3 co-assembles with beta4.
Keywords (eng)
nAChRAlpha 5antibodyIPNSCGsubunit composition
Keywords (deu)
naChRAlpha 5AntikoerperIPNSCGZusammensetzung
Subject (deu)
Type (deu)
Persistent identifier
Number of pages
72
Association (deu)
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