Title (eng)
Modulation of STAT3 isoforms in acute myeloid leukaemia
Parallel title (deu)
Modulation der STAT3 Isoformen in akuter myeloischer Leukämie
Author
Verena Greß
Advisor
Dagmar Stoiber-Sakaguchi
Assessor
Dagmar Stoiber-Sakaguchi
Abstract (deu)
„Signal Transducer and Activator of Transcription 3“, kurz STAT3, wird von verschiedensten Signalwegen mit unterschiedlichen Stimuli aktiviert und reguliert Zielgene die in der Entwicklung und Differenzierung verschiedenster Zelltypen eine Rolle spielen. STAT3 kommt in zwei alternativen Splicevarianten vor, STAT3α und STAT3β. Bezogen auf die Rolle die STAT3 in der Krebsentstehung spielt wurde gezeigt, dass es hierbei abnormal exprimiert wird und entweder eine Rolle als Onkogen oder Tumorsuppressor einnimmt. Vorläufige Ergebnisse weisen darauf hin, dass die STAT3β Isoform eine Funktion als Tumorsuppresor in akuter myeloischer Leukämie (AML) hat. Das vorliegende Masterarbeitsprojekt konzentriert sich auf die Etablierung eines STAT3 knock-out sowie Überexprimierung von STAT3α oder STAT3β in AML Zelllinien. Sechs ausgesuchte AML Zelllinien wurden auf ihre basale Expression der STAT3 Isoformen hin untersucht. Neu geklonte CRISPR/Cas9-sgRNA Plasmide wurden erfolgreich in HEK 293T Zellen validiert. Jedoch zeigten AML Zellen nach Transfektion der verifizierten Plasmiden rapide Einbrüche im Überleben der Zellen unter Selektionsdruck. In einem zweiten Ansatz wurden AML Zelllinien mit Lentiviren infiziert die Plasmide für die Überexpression von STAT3α oder STAT3β enthielten. Transduktion eines Kontrolplasmids für GFP zeigte eine hohe Effizienz der lentiviralen Infektion wohingegen mit den STAT3 Plasmiden infizierte Zellen einen Einbruch im Zellüberleben zeigten. Aktuell war es nicht möglich stabile Zelllinien zu generieren um die Rolle von STAT3 in AML zu studieren. Zusätzliche Experimente werden benötigt um das Problem des verminderten Überleben sowohl in sgRNAs nukleofizierten als auch mit lentiviral übertragenen STAT3 Überexpressionsplasmiden in AML Zellen abzuklären.
Abstract (eng)
Signal Transducer and Activator of Transcription 3 (STAT3) is downstream of pathways activated by several different stimuli and regulates target genes involved in development and differentiation of various cell types. STAT3 occurs in two alternatively spliced variants, STAT3α and STAT3β. In the context of cancer, STAT3 was shown to be abnormally expressed and depending on the cellular context can play a role either as oncogene or tumour-suppressor. Preliminary data indicate that the STAT3β isoform has a tumour suppressive function in acute myeloid leukaemia (AML). This master thesis project focused on the establishment of STAT3 knock-out and STAT3α or STAT3β overexpressing AML cell lines. Six AML cell lines were characterised for their basic expression of the STAT3 isoforms. Newly cloned CRISPR/Cas9-sgRNA plasmids were successfully validated in HEK 293T cells, demonstrating the KO on the mRNA, protein and genomic level. However, nucleofection of AML cell lines with the verified plasmids demonstrated a rapid drop in viability under selection with antibiotics. In a second approach, AML cell lines were infected with lentivirus containing plasmids carrying either STAT3α or STAT3β to induce overexpression. Transduction with a GFP control plasmid showed high efficiencies of lentiviral infection whereas cells infected with the STAT3 plasmids exhibited a drop in viability. So far we were not able to create stable cell lines for studying the role of STAT3 in AML. Additional experiments are necessary to address the problem of reduced viability when AML cells are nucleofected or lentivirally infected with the STAT3 sgRNA or STAT3 overexpression plasmids.
Keywords (eng)
leukaemiaAMLSTAT3isoformsCRISPRoverexpressioncell lines
Keywords (deu)
LeukämieAMLSTAT3IsoformenCRISPRÜberexpressionZelllinien
Subject (deu)
Subject (deu)
Type (deu)
Persistent identifier
https://phaidra.univie.ac.at/o:1339066
rdau:P60550 (deu)
66 Seiten : Illustrationen, Diagramme
Number of pages
66
Association (deu)
Title (eng)
Modulation of STAT3 isoforms in acute myeloid leukaemia
Parallel title (deu)
Modulation der STAT3 Isoformen in akuter myeloischer Leukämie
Author
Verena Greß
Abstract (deu)
„Signal Transducer and Activator of Transcription 3“, kurz STAT3, wird von verschiedensten Signalwegen mit unterschiedlichen Stimuli aktiviert und reguliert Zielgene die in der Entwicklung und Differenzierung verschiedenster Zelltypen eine Rolle spielen. STAT3 kommt in zwei alternativen Splicevarianten vor, STAT3α und STAT3β. Bezogen auf die Rolle die STAT3 in der Krebsentstehung spielt wurde gezeigt, dass es hierbei abnormal exprimiert wird und entweder eine Rolle als Onkogen oder Tumorsuppressor einnimmt. Vorläufige Ergebnisse weisen darauf hin, dass die STAT3β Isoform eine Funktion als Tumorsuppresor in akuter myeloischer Leukämie (AML) hat. Das vorliegende Masterarbeitsprojekt konzentriert sich auf die Etablierung eines STAT3 knock-out sowie Überexprimierung von STAT3α oder STAT3β in AML Zelllinien. Sechs ausgesuchte AML Zelllinien wurden auf ihre basale Expression der STAT3 Isoformen hin untersucht. Neu geklonte CRISPR/Cas9-sgRNA Plasmide wurden erfolgreich in HEK 293T Zellen validiert. Jedoch zeigten AML Zellen nach Transfektion der verifizierten Plasmiden rapide Einbrüche im Überleben der Zellen unter Selektionsdruck. In einem zweiten Ansatz wurden AML Zelllinien mit Lentiviren infiziert die Plasmide für die Überexpression von STAT3α oder STAT3β enthielten. Transduktion eines Kontrolplasmids für GFP zeigte eine hohe Effizienz der lentiviralen Infektion wohingegen mit den STAT3 Plasmiden infizierte Zellen einen Einbruch im Zellüberleben zeigten. Aktuell war es nicht möglich stabile Zelllinien zu generieren um die Rolle von STAT3 in AML zu studieren. Zusätzliche Experimente werden benötigt um das Problem des verminderten Überleben sowohl in sgRNAs nukleofizierten als auch mit lentiviral übertragenen STAT3 Überexpressionsplasmiden in AML Zellen abzuklären.
Abstract (eng)
Signal Transducer and Activator of Transcription 3 (STAT3) is downstream of pathways activated by several different stimuli and regulates target genes involved in development and differentiation of various cell types. STAT3 occurs in two alternatively spliced variants, STAT3α and STAT3β. In the context of cancer, STAT3 was shown to be abnormally expressed and depending on the cellular context can play a role either as oncogene or tumour-suppressor. Preliminary data indicate that the STAT3β isoform has a tumour suppressive function in acute myeloid leukaemia (AML). This master thesis project focused on the establishment of STAT3 knock-out and STAT3α or STAT3β overexpressing AML cell lines. Six AML cell lines were characterised for their basic expression of the STAT3 isoforms. Newly cloned CRISPR/Cas9-sgRNA plasmids were successfully validated in HEK 293T cells, demonstrating the KO on the mRNA, protein and genomic level. However, nucleofection of AML cell lines with the verified plasmids demonstrated a rapid drop in viability under selection with antibiotics. In a second approach, AML cell lines were infected with lentivirus containing plasmids carrying either STAT3α or STAT3β to induce overexpression. Transduction with a GFP control plasmid showed high efficiencies of lentiviral infection whereas cells infected with the STAT3 plasmids exhibited a drop in viability. So far we were not able to create stable cell lines for studying the role of STAT3 in AML. Additional experiments are necessary to address the problem of reduced viability when AML cells are nucleofected or lentivirally infected with the STAT3 sgRNA or STAT3 overexpression plasmids.
Keywords (eng)
leukaemiaAMLSTAT3isoformsCRISPRoverexpressioncell lines
Keywords (deu)
LeukämieAMLSTAT3IsoformenCRISPRÜberexpressionZelllinien
Subject (deu)
Subject (deu)
Type (deu)
Persistent identifier
https://phaidra.univie.ac.at/o:1339067
Number of pages
66
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