Title (eng)
Identification and characterization of almond proteins homologous to Bet v 1 and their contribution to almond allergy associated with birch pollinosis
Parallel title (deu)
Identifikation und Charakterisierung von Mandeln-Proteinen homolog zu Bet v 1 und deren Beitrag zur Mandelallergie im Zusammenhang mit Birkenpollinose
Author
Nadja Crvenjak
Advisor
Merima Bublin
Assessor
Merima Bublin
Abstract (deu)
Einleitung: Die mit der Birkenpollinose verbundene Mandelallergie deutet stark auf das Vorhandensein eines kreuzreagierenden Bet v 1-Homologs in Mandeln hin. Ziel der Studie war es, Bet v 1-Homologe aus Mandeln zu identifizieren und ihre allergenen Eigenschaften zu untersuchen. Methoden: Mandelextrakt wurde mittels Tandem-Massenspektrometrie analysiert, um die Proteinsequenzen zu identifizieren, die mit sieben zuvor identifizierten Pru du 1-Genen übereinstimmen. Die identifizierte Isoform Pru du 1.06A wurde in Escherichia coli exprimiert und durch MALDI-TOF und Zirkulardichroismus-Spektroskopie charakterisiert. Das für rPru du 1.06A spezifische IgE wurde mit einem quantitativen ELISA und Seren von Mandelallergikern bestimmt. Die Kreuzreaktivität mit Bet v 1 und anderen Bet v 1-Homologen wurde mit einem dosisabhängigen IgE-ELISA getestet. Seine Fähigkeit, eine Mastzellenaktivierung auszulösen, wurde mit einer humanen FceRI-transfizierten Rattenbasophilen-Zelllinie getestet. Ergebnisse: rPru du 1.06A hat eine Molekularmasse von 18.090 Da, 56 % Aminosäuresequenzidentität und eine nahezu identische Struktur wie Bet v 1. Die Thermostabilitätsanalyse ergab eine Denaturierung von rPru du 1.06A bei 55 °C. rPru du 1-spezifisches IgE wurde in 82 % der untersuchten Seren nachgewiesen. rBet v 1 hemmte die IgE-Bindung an rPru du 1 zu 100 % und umgekehrt zu 40%. Die Kreuzreaktivität zu verwandten Allergenen aus Erdnuss, Pfirsich oder Apfel lag in einem Bereich von 36-81%. Die maximale Zellaktivierung wurde bei einer Konzentration von 1 µg/ml von rPru du 1.06A und 0,1 ng/ml von Bet v 1 erreicht. Schlussfolgerung: Diese Studie liefert die erste experimentelle Konformation eines kreuzreaktiven Bet v 1-Homologs in Mandeln.
Abstract (eng)
Introduction: Almond allergy associated with birch-pollinosis strongly suggests the presence of a cross-reacting Bet v 1- homologue in almond. The aim of the study was to identify Bet v 1-homologues from almond and to investigate its allergenic properties. Methods: Almond extract was analyzed by tandem mass spectrometry to identify the protein sequences matching seven previously identified Pru du 1 genes. The identified isoform Pru du 1.06A was expressed in Escherichia coli and characterized by MALDI-TOF and circular dichroism spectroscopy. IgE-specific to rPru du 1.06A was determined using a quantitative ELISA and sera from almond allergic subjects. Cross-reactivity to Bet v 1 and other Bet v 1 homologous were tested by dose-dependent IgE ELISA. Its ability to induce mast cell activation was tested using a human FceRI-transfected rat basophil cell line. Results: rPru du 1.06A has a molecular mass of 18,090 Da, 56% amino acid sequence identity and nearly identical structure to Bet v 1. Thermostability analysis revealed denaturation of rPru du 1.06A at 55 °C. rPru du 1-spezific IgE was detected in 82% of the tested sera. rBet v 1 inhibited IgE‐binding to rPru du 1 by 100%, while vice versa by 40%. Cross-reactivity to related allergens from peanut, peach or apple was in a range of 36-81%. Maximum cell activation was achieved at a concentration of 1 µg/ml of rPru du 1.06A and 0.1 ng/ml of Bet v 1. Conclusion: This study provides the first experimental conformation of a cross-reactive Bet v 1 homologue in almond.
Keywords (deu)
ÜberempfindlichkeitsreaktionAllergieMandelnAllergeneBe t v 1 homologeIgE KreuzreaktivitätImmunoglobulin E
Keywords (eng)
Hypersensitivity reactionAllergyAlmondsAllergensBet v 1 homologsIgE cross-reactivityImmunoglobulin E.
Subject (deu)
Type (deu)
Persistent identifier
https://phaidra.univie.ac.at/o:1670914
rdau:P60550 (deu)
85 Seiten : Illustrationen
Number of pages
85
Association (deu)
Title (eng)
Identification and characterization of almond proteins homologous to Bet v 1 and their contribution to almond allergy associated with birch pollinosis
Parallel title (deu)
Identifikation und Charakterisierung von Mandeln-Proteinen homolog zu Bet v 1 und deren Beitrag zur Mandelallergie im Zusammenhang mit Birkenpollinose
Author
Nadja Crvenjak
Abstract (deu)
Einleitung: Die mit der Birkenpollinose verbundene Mandelallergie deutet stark auf das Vorhandensein eines kreuzreagierenden Bet v 1-Homologs in Mandeln hin. Ziel der Studie war es, Bet v 1-Homologe aus Mandeln zu identifizieren und ihre allergenen Eigenschaften zu untersuchen. Methoden: Mandelextrakt wurde mittels Tandem-Massenspektrometrie analysiert, um die Proteinsequenzen zu identifizieren, die mit sieben zuvor identifizierten Pru du 1-Genen übereinstimmen. Die identifizierte Isoform Pru du 1.06A wurde in Escherichia coli exprimiert und durch MALDI-TOF und Zirkulardichroismus-Spektroskopie charakterisiert. Das für rPru du 1.06A spezifische IgE wurde mit einem quantitativen ELISA und Seren von Mandelallergikern bestimmt. Die Kreuzreaktivität mit Bet v 1 und anderen Bet v 1-Homologen wurde mit einem dosisabhängigen IgE-ELISA getestet. Seine Fähigkeit, eine Mastzellenaktivierung auszulösen, wurde mit einer humanen FceRI-transfizierten Rattenbasophilen-Zelllinie getestet. Ergebnisse: rPru du 1.06A hat eine Molekularmasse von 18.090 Da, 56 % Aminosäuresequenzidentität und eine nahezu identische Struktur wie Bet v 1. Die Thermostabilitätsanalyse ergab eine Denaturierung von rPru du 1.06A bei 55 °C. rPru du 1-spezifisches IgE wurde in 82 % der untersuchten Seren nachgewiesen. rBet v 1 hemmte die IgE-Bindung an rPru du 1 zu 100 % und umgekehrt zu 40%. Die Kreuzreaktivität zu verwandten Allergenen aus Erdnuss, Pfirsich oder Apfel lag in einem Bereich von 36-81%. Die maximale Zellaktivierung wurde bei einer Konzentration von 1 µg/ml von rPru du 1.06A und 0,1 ng/ml von Bet v 1 erreicht. Schlussfolgerung: Diese Studie liefert die erste experimentelle Konformation eines kreuzreaktiven Bet v 1-Homologs in Mandeln.
Abstract (eng)
Introduction: Almond allergy associated with birch-pollinosis strongly suggests the presence of a cross-reacting Bet v 1- homologue in almond. The aim of the study was to identify Bet v 1-homologues from almond and to investigate its allergenic properties. Methods: Almond extract was analyzed by tandem mass spectrometry to identify the protein sequences matching seven previously identified Pru du 1 genes. The identified isoform Pru du 1.06A was expressed in Escherichia coli and characterized by MALDI-TOF and circular dichroism spectroscopy. IgE-specific to rPru du 1.06A was determined using a quantitative ELISA and sera from almond allergic subjects. Cross-reactivity to Bet v 1 and other Bet v 1 homologous were tested by dose-dependent IgE ELISA. Its ability to induce mast cell activation was tested using a human FceRI-transfected rat basophil cell line. Results: rPru du 1.06A has a molecular mass of 18,090 Da, 56% amino acid sequence identity and nearly identical structure to Bet v 1. Thermostability analysis revealed denaturation of rPru du 1.06A at 55 °C. rPru du 1-spezific IgE was detected in 82% of the tested sera. rBet v 1 inhibited IgE‐binding to rPru du 1 by 100%, while vice versa by 40%. Cross-reactivity to related allergens from peanut, peach or apple was in a range of 36-81%. Maximum cell activation was achieved at a concentration of 1 µg/ml of rPru du 1.06A and 0.1 ng/ml of Bet v 1. Conclusion: This study provides the first experimental conformation of a cross-reactive Bet v 1 homologue in almond.
Keywords (deu)
ÜberempfindlichkeitsreaktionAllergieMandelnAllergeneBe t v 1 homologeIgE KreuzreaktivitätImmunoglobulin E
Keywords (eng)
Hypersensitivity reactionAllergyAlmondsAllergensBet v 1 homologsIgE cross-reactivityImmunoglobulin E.
Subject (deu)
Type (deu)
Persistent identifier
https://phaidra.univie.ac.at/o:1680707
Number of pages
85
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