Title (deu)
Entwicklung von Real Time PCR-Methoden zur Bestimmung von Mandel und Haselnuss in Lebensmitteln
Author
Caroline Leidinger
Advisor
Gerhard Sontag
Assessor
Gerhard Sontag
Abstract (deu)
Die vorliegende Diplomarbeit beschreibt die Entwicklung, Optimierung und Validierung einer Singleplex Real Time PCR-Methode zur Bestimmung von potentiell allergener Mandel und einer Duplex Real Time PCR-Methode zur Bestimmung von Mandel und Haselnuss in Lebensmitteln. Zum Entwurf der Primer und TaqMan Sonden wurden die Gensequenzen der Allergene Cor a 1 und Amandin verwendet. Nach der Optimierung der Primerkonzentration wurden die Primer auf Kreuzreaktivität mit Lebensmitteln getestet. Die ausgewählten Primer erwiesen sich als spezifisch für Mandel- bzw. Haselnuss-DNA und zeigten mit keinem der untersuchten Lebensmittel eine Kreuzreaktivität. Die Effizienz der entwickelten Real Time PCR-Methoden wurden mittels seriell verdünnter Mandel- und/oder Haselnuss-DNA ermittelt. Die Effizienz der Singleplex-Methode betrug 99,0%. Nach einer weiteren Optimierung wurde auch mit dem Duplex-Assay eine sehr gute Effizienz (Mandel-Assay 103,7%, Haselnuss-Assay 98,4%) erreicht. Die Nachweisgrenze des optimierten Duplex-Assays betrug 50 pg Mandel- bzw. Haselnuss-DNA. Um die Anwendbarkeit der entwickelten Real Time PCR-Methoden zu prüfen, wurden unter genau definierten Bedingungen hergestellte Modelllebensmittel und kommerziell erhältliche Lebensmittel analysiert. In allen kommerziellen Produkten, bei denen Mandel und/oder Haselnuss auf der Verpackung deklariert war, wurden diese nachgewiesen. Bei der Analyse der Produkte, die laut Verpackungsangabe keine Mandel und/oder Haselnuss enthielten, wurde in allen Fällen ein negatives Ergebnis erhalten. Im Rahmen dieser Diplomarbeit wurden außerdem spezifische Primerpaare zur Bestimmung von potentiell allergener Walnuss und Traube entworfen.
Keywords (deu)
Real Time Polymerase KettenreaktionMandelHaselnussAllergieLebensmittelallergenePrimerTaqMan SondeAgarosegelelektrophorese
Subject (deu)
Subject (deu)
Type (deu)
Persistent identifier
https://phaidra.univie.ac.at/o:1254199
rdau:P60550 (deu)
IX, 149 S. : graph. Darst.
Number of pages
164
Association (deu)
Title (deu)
Entwicklung von Real Time PCR-Methoden zur Bestimmung von Mandel und Haselnuss in Lebensmitteln
Author
Caroline Leidinger
Abstract (deu)
Die vorliegende Diplomarbeit beschreibt die Entwicklung, Optimierung und Validierung einer Singleplex Real Time PCR-Methode zur Bestimmung von potentiell allergener Mandel und einer Duplex Real Time PCR-Methode zur Bestimmung von Mandel und Haselnuss in Lebensmitteln. Zum Entwurf der Primer und TaqMan Sonden wurden die Gensequenzen der Allergene Cor a 1 und Amandin verwendet. Nach der Optimierung der Primerkonzentration wurden die Primer auf Kreuzreaktivität mit Lebensmitteln getestet. Die ausgewählten Primer erwiesen sich als spezifisch für Mandel- bzw. Haselnuss-DNA und zeigten mit keinem der untersuchten Lebensmittel eine Kreuzreaktivität. Die Effizienz der entwickelten Real Time PCR-Methoden wurden mittels seriell verdünnter Mandel- und/oder Haselnuss-DNA ermittelt. Die Effizienz der Singleplex-Methode betrug 99,0%. Nach einer weiteren Optimierung wurde auch mit dem Duplex-Assay eine sehr gute Effizienz (Mandel-Assay 103,7%, Haselnuss-Assay 98,4%) erreicht. Die Nachweisgrenze des optimierten Duplex-Assays betrug 50 pg Mandel- bzw. Haselnuss-DNA. Um die Anwendbarkeit der entwickelten Real Time PCR-Methoden zu prüfen, wurden unter genau definierten Bedingungen hergestellte Modelllebensmittel und kommerziell erhältliche Lebensmittel analysiert. In allen kommerziellen Produkten, bei denen Mandel und/oder Haselnuss auf der Verpackung deklariert war, wurden diese nachgewiesen. Bei der Analyse der Produkte, die laut Verpackungsangabe keine Mandel und/oder Haselnuss enthielten, wurde in allen Fällen ein negatives Ergebnis erhalten. Im Rahmen dieser Diplomarbeit wurden außerdem spezifische Primerpaare zur Bestimmung von potentiell allergener Walnuss und Traube entworfen.
Keywords (deu)
Real Time Polymerase KettenreaktionMandelHaselnussAllergieLebensmittelallergenePrimerTaqMan SondeAgarosegelelektrophorese
Subject (deu)
Subject (deu)
Type (deu)
Persistent identifier
https://phaidra.univie.ac.at/o:1254200
Number of pages
164
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