Title (deu)
Transfektionsoptimierung an Primärkulturen hippokampaler Neurone
Parallel title (eng)
Optimization of transfection on primary hippocampal neurons
Author
Lena Rubi
Advisor
Axel Schmid
Assessor
Axel Schmid
Abstract (deu)
In mehreren Versuchsreihen soll unter schrittweisem Verändern einzelner Parameter die Transfektionseffizienz an hippokampalen Neuronen optimiert werden. Es werden die Transfektionsreagenzien CalPhosTM, LipofectamineTM 2000, GenCarrier-2TM und FuGENE® HD (verbreitete, kommerziell erhältliche Transfektionsreagenzien) anhand der Transfektion von GFP miteinander verglichen. Anhand von elektrophysiologischen Messungen wird der Zustand der transfizierten Zellen beurteilt.
Der Vergleich der Transfektionsreagenzien zeigte, dass nur mit CalPhosTM und LipofectamineTM 2000 ein verwendbarer Transfektionserfolg zu erzielen war. Außerdem
war eine starke Abhängigkeit des Transfektionserfolges vom Alter der Neurone zu erkennen. Neurone die unter 7 Tage alt waren, erzielten die höchsten Transfektionserfolge. Bei der Variation der LipofectamineTM 2000 Menge zeigte sich, dass niedrigere Konzentrationen einen wesentlich höheren Erfolg lieferten als höhere Konzentrationen LipofectamineTM 2000 und dass höhere Konzentrationen die Zellen zunehmend schädigten, was auch durch die elektrophysiologischen Messungen sichtbar wurde. Anhand zweier unterschiedlicher LipofectamineTM 2000 Konzentrationen wurden die Auswirkungen verschiedener DNA Mengen auf die Transfektionseffizienz getestet. Es wurde ein weitaus höherer Transfektionserfolg mit DNA Mengen über 1 μg als mit Mengen unter 1 μg DNA sichtbar. Als letzter Parameter wurde der Einfluss von Medium-Zusatzstoffen wie Serum Supplements (Nuts) und einem Hemmer von Glutamat-Rezeptor-abhängiger Erregungstoxizität (KYN) getestet. Diese Stoffe zeigten keinen Einfluss auf den Transfektionserfolg.
Mit einer LipofectamineTM 2000 Menge von 7,5 μL und einer DNA Menge von über 1 μg konnte ein, mit einer Effizienz von über 5 %, zumindest für elektrophysiologische Versuche ansprechender Transfektionserfolg erzielt werden.
Abstract (eng)
In this diploma thesis the transfection reagents CalPhosTM, LipofectamineTM 2000, GenCarrier-2TM and FuGENE®HD, widely used, commercially available transfection reagents, have been compared and tested on primary hippocampal neurons. To optimize the transfection efficiency, different parameters were varied. Additionally the condition of transfected cells was evaluated by electrophysiological measurements.
The comparison of the different transfection reagents indicated, that only CalPhosTM and LipofectamineTM 2000 led to an acceptable transfection success. Furthermore, a dependence of transfection efficiency on the cell-age was observed. Experiments on cells of different ages showed that best transfection success was obtained with cells younger than 7 days. The optimal concentration of LipofectamineTM 2000 was tested in another series of experiments. An even better success with low concentration of LipofectamineTM 2000 and a destructive effect, when high concentrations of LipofectamineTM2000 were used, was observed. The effect on transfection efficiency with different DNA concentrations was tested by using 7,5μL and 15μL LipofectamineTM 2000. With both concentrations of LipofectamineTM2000 a better success of transfection was observed with DNA concentrations higher than 1μg, but further increasing the DNA amount did not continue to enhance transfection rates.
In the last set of experiments the influence of medium-supplements, like Nuts and KYN, was investigated, but these additions did not reveal any positive effect on transfection rates.
In conclusion I report, that for hippocampal neurons in primary culture, 7,5μL LipofectamineTM 2000 and more than 1μg DNA, when applied on young neurons (<14 days), yields highest transfection efficiency (> 5%).
Keywords (eng)
transfectionhippocampal neuronsLipofectamine 2000CalPhosGenCarrier-2FuGENE
Keywords (deu)
TransfektionHippokampusneuroneLipofectamine 2000CalPhosGenCarrier-2FuGENE
Subject (deu)
Subject (deu)
Type (deu)
Persistent identifier
https://phaidra.univie.ac.at/o:1275261
rdau:P60550 (deu)
86 S.
Number of pages
86
Association (deu)
Title (deu)
Transfektionsoptimierung an Primärkulturen hippokampaler Neurone
Parallel title (eng)
Optimization of transfection on primary hippocampal neurons
Author
Lena Rubi
Abstract (deu)
In mehreren Versuchsreihen soll unter schrittweisem Verändern einzelner Parameter die Transfektionseffizienz an hippokampalen Neuronen optimiert werden. Es werden die Transfektionsreagenzien CalPhosTM, LipofectamineTM 2000, GenCarrier-2TM und FuGENE® HD (verbreitete, kommerziell erhältliche Transfektionsreagenzien) anhand der Transfektion von GFP miteinander verglichen. Anhand von elektrophysiologischen Messungen wird der Zustand der transfizierten Zellen beurteilt.
Der Vergleich der Transfektionsreagenzien zeigte, dass nur mit CalPhosTM und LipofectamineTM 2000 ein verwendbarer Transfektionserfolg zu erzielen war. Außerdem
war eine starke Abhängigkeit des Transfektionserfolges vom Alter der Neurone zu erkennen. Neurone die unter 7 Tage alt waren, erzielten die höchsten Transfektionserfolge. Bei der Variation der LipofectamineTM 2000 Menge zeigte sich, dass niedrigere Konzentrationen einen wesentlich höheren Erfolg lieferten als höhere Konzentrationen LipofectamineTM 2000 und dass höhere Konzentrationen die Zellen zunehmend schädigten, was auch durch die elektrophysiologischen Messungen sichtbar wurde. Anhand zweier unterschiedlicher LipofectamineTM 2000 Konzentrationen wurden die Auswirkungen verschiedener DNA Mengen auf die Transfektionseffizienz getestet. Es wurde ein weitaus höherer Transfektionserfolg mit DNA Mengen über 1 μg als mit Mengen unter 1 μg DNA sichtbar. Als letzter Parameter wurde der Einfluss von Medium-Zusatzstoffen wie Serum Supplements (Nuts) und einem Hemmer von Glutamat-Rezeptor-abhängiger Erregungstoxizität (KYN) getestet. Diese Stoffe zeigten keinen Einfluss auf den Transfektionserfolg.
Mit einer LipofectamineTM 2000 Menge von 7,5 μL und einer DNA Menge von über 1 μg konnte ein, mit einer Effizienz von über 5 %, zumindest für elektrophysiologische Versuche ansprechender Transfektionserfolg erzielt werden.
Abstract (eng)
In this diploma thesis the transfection reagents CalPhosTM, LipofectamineTM 2000, GenCarrier-2TM and FuGENE®HD, widely used, commercially available transfection reagents, have been compared and tested on primary hippocampal neurons. To optimize the transfection efficiency, different parameters were varied. Additionally the condition of transfected cells was evaluated by electrophysiological measurements.
The comparison of the different transfection reagents indicated, that only CalPhosTM and LipofectamineTM 2000 led to an acceptable transfection success. Furthermore, a dependence of transfection efficiency on the cell-age was observed. Experiments on cells of different ages showed that best transfection success was obtained with cells younger than 7 days. The optimal concentration of LipofectamineTM 2000 was tested in another series of experiments. An even better success with low concentration of LipofectamineTM 2000 and a destructive effect, when high concentrations of LipofectamineTM2000 were used, was observed. The effect on transfection efficiency with different DNA concentrations was tested by using 7,5μL and 15μL LipofectamineTM 2000. With both concentrations of LipofectamineTM2000 a better success of transfection was observed with DNA concentrations higher than 1μg, but further increasing the DNA amount did not continue to enhance transfection rates.
In the last set of experiments the influence of medium-supplements, like Nuts and KYN, was investigated, but these additions did not reveal any positive effect on transfection rates.
In conclusion I report, that for hippocampal neurons in primary culture, 7,5μL LipofectamineTM 2000 and more than 1μg DNA, when applied on young neurons (<14 days), yields highest transfection efficiency (> 5%).
Keywords (eng)
transfectionhippocampal neuronsLipofectamine 2000CalPhosGenCarrier-2FuGENE
Keywords (deu)
TransfektionHippokampusneuroneLipofectamine 2000CalPhosGenCarrier-2FuGENE
Subject (deu)
Subject (deu)
Type (deu)
Persistent identifier
https://phaidra.univie.ac.at/o:1275262
Number of pages
86
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