Title (eng)
Role of sphingosine kinase 1 expression in the osteoblast-osteoclast crosstalk
Parallel title (deu)
Die Rolle der Sphingosin Kinase 1 Expression in der Osteoblasten-Osteoklasten-Kommunikation
Author
Lisa-Maria Winkler
Advisor
Oskar Hoffmann
Assessor
Oskar Hoffmann
Abstract (deu)
Die Kommunikation zwischen Osteoblasten und Osteoklasten läuft über verschiedene Kanäle, zum Beispiel über die Zytokine. Spezielle Zytokine, die von Osteoklasten sekretiert werden, werden auch „Klastokine” genannt. Diese sind noch nicht so gut erforscht wie die von Osteoblasten sekretierten Zytokine.
Ein vermutetes Klastokin ist Sphingosin-1-Phosphat. Man hat herausgefunden, dass dieses Molekül die Mineralisation von Osteoblasten fördert. Einige Forscher haben einen Anstieg an SphK1 während der Osteoklastogenese festgestellt. SphK1 ist eines der Enzyme, das für die Phosphorylierung von Sphingosin zu Sphingosin-1-Phosphat verantwortlich ist.
Basierend auf diesen Hypothesen verwendeten wir Zelllysate von RAW 264.7-Zellkulturen und Zelllysate von Einzel- und Co-Kulturen primärer Maus-Osteoblasten und -Osteoklastenvorstufen zu verschiedenen Zeitpunkten nach der Zugabe von RANKL. Die Zelllysate wurden mittels Gelelektrophorese aufgetrennt und die SphK1 mit Western-Blots detektiert. Wir konnten dabei keinen signifikanten Anstieg während der Osteoklastogenese beobachten.
Allerdings entdeckten wir einen Unterschied im Western Blot von RAW 264.7-Zellen und primären Maus-Osteoblasten gegenüber primären Maus-Osteoklasten. In den Osteoklasten war eine zusätzliche Isoform sichtbar, die in RAW 264.7-Zellen und Osteoblasten höchstens sehr schwach ausgeprägt war.
Weitere Untersuchungen mit sensibleren Methoden sind notwendig, um die vorliegenden Ergebnisse zu bestätigen. Auch sollten Untersuchungen im Überstand der Zellkulturen auf S1P durchgeführt werden, um genauere Ergebnisse über die Entwicklung während der Osteoklastogenese zu erhalten.
Abstract (eng)
Osteoclast-osteoblast communication works through different channels, one of those are the cytokines. Cytokines secreted by osteoclasts are also called ‘clastokines’ and they are not as well researched yet as well as the cytokines secreted by osteoblasts.
One suspected clastokine is sphingosine-1-phosphate. This molecule was found to enhance mineralization in osteoblasts. Some researchers found an increase in Sphk1, which is one of the enzymes responsible for phosphorylation of sphingosine into sphingosine-1-phosphate during osteoclastogenesis.
Based on this premise we prepared cell lysates from single cell culture of RAW 264.7 cells as well as lysates from single and co-culture of primary mouse osteoblast and osteoclast precursors at different time points after RANKL addition and separated them using gel electrophoresis. Using western blot detection, we were unable to find an increase of SphK1 during osteoclastogenesis.
What we could see were different isoforms of SphK1 in RAW 264.7 cells and primary mouse osteoblasts versus primary mouse osteoclasts. In the mouse osteoclasts an additional isoform was visible, which we could only see very faintly in the mouse osteoblasts and RAW 264.7 cells.
Further research is needed to confirm these findings, using more sensitive detection methods and additional examination of sphingosine-1-phosphate in the supernatant.
Keywords (eng)
osteoclast-osteoblast crosstalksphingosine kinasewestern blotosteoclastogenesis
Keywords (deu)
Osteoblasten-Osteoklasten-KommunikationSphingosin KinaseWesternblotOsteoklastogenese
Subject (deu)
Type (deu)
Persistent identifier
https://phaidra.univie.ac.at/o:1347816
rdau:P60550 (deu)
74 Seiten : Illustrationen, Diagramme
Number of pages
74
Study plan
Diplomstudium Pharmazie
[UA]
[449]
Association (deu)
Title (eng)
Role of sphingosine kinase 1 expression in the osteoblast-osteoclast crosstalk
Parallel title (deu)
Die Rolle der Sphingosin Kinase 1 Expression in der Osteoblasten-Osteoklasten-Kommunikation
Author
Lisa-Maria Winkler
Abstract (deu)
Die Kommunikation zwischen Osteoblasten und Osteoklasten läuft über verschiedene Kanäle, zum Beispiel über die Zytokine. Spezielle Zytokine, die von Osteoklasten sekretiert werden, werden auch „Klastokine” genannt. Diese sind noch nicht so gut erforscht wie die von Osteoblasten sekretierten Zytokine.
Ein vermutetes Klastokin ist Sphingosin-1-Phosphat. Man hat herausgefunden, dass dieses Molekül die Mineralisation von Osteoblasten fördert. Einige Forscher haben einen Anstieg an SphK1 während der Osteoklastogenese festgestellt. SphK1 ist eines der Enzyme, das für die Phosphorylierung von Sphingosin zu Sphingosin-1-Phosphat verantwortlich ist.
Basierend auf diesen Hypothesen verwendeten wir Zelllysate von RAW 264.7-Zellkulturen und Zelllysate von Einzel- und Co-Kulturen primärer Maus-Osteoblasten und -Osteoklastenvorstufen zu verschiedenen Zeitpunkten nach der Zugabe von RANKL. Die Zelllysate wurden mittels Gelelektrophorese aufgetrennt und die SphK1 mit Western-Blots detektiert. Wir konnten dabei keinen signifikanten Anstieg während der Osteoklastogenese beobachten.
Allerdings entdeckten wir einen Unterschied im Western Blot von RAW 264.7-Zellen und primären Maus-Osteoblasten gegenüber primären Maus-Osteoklasten. In den Osteoklasten war eine zusätzliche Isoform sichtbar, die in RAW 264.7-Zellen und Osteoblasten höchstens sehr schwach ausgeprägt war.
Weitere Untersuchungen mit sensibleren Methoden sind notwendig, um die vorliegenden Ergebnisse zu bestätigen. Auch sollten Untersuchungen im Überstand der Zellkulturen auf S1P durchgeführt werden, um genauere Ergebnisse über die Entwicklung während der Osteoklastogenese zu erhalten.
Abstract (eng)
Osteoclast-osteoblast communication works through different channels, one of those are the cytokines. Cytokines secreted by osteoclasts are also called ‘clastokines’ and they are not as well researched yet as well as the cytokines secreted by osteoblasts.
One suspected clastokine is sphingosine-1-phosphate. This molecule was found to enhance mineralization in osteoblasts. Some researchers found an increase in Sphk1, which is one of the enzymes responsible for phosphorylation of sphingosine into sphingosine-1-phosphate during osteoclastogenesis.
Based on this premise we prepared cell lysates from single cell culture of RAW 264.7 cells as well as lysates from single and co-culture of primary mouse osteoblast and osteoclast precursors at different time points after RANKL addition and separated them using gel electrophoresis. Using western blot detection, we were unable to find an increase of SphK1 during osteoclastogenesis.
What we could see were different isoforms of SphK1 in RAW 264.7 cells and primary mouse osteoblasts versus primary mouse osteoclasts. In the mouse osteoclasts an additional isoform was visible, which we could only see very faintly in the mouse osteoblasts and RAW 264.7 cells.
Further research is needed to confirm these findings, using more sensitive detection methods and additional examination of sphingosine-1-phosphate in the supernatant.
Keywords (eng)
osteoclast-osteoblast crosstalksphingosine kinasewestern blotosteoclastogenesis
Keywords (deu)
Osteoblasten-Osteoklasten-KommunikationSphingosin KinaseWesternblotOsteoklastogenese
Subject (deu)
Type (deu)
Persistent identifier
https://phaidra.univie.ac.at/o:1347817
Number of pages
74
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